六合拳开奖结果

公司动态 | News
当前位置:首页 > 公司动态 氨基柱的液相测定实验简析
氨基柱的液相测定实验简析
点击次数:58 发布时间:2020-01-16
   氨基柱可同时用于正相条件和反相条件;但是要注意正相溶剂和反相溶剂往往是不互溶的,对这一点的忽略可能会带给使用者一些麻烦。对于新柱首先请注意打开分析测试说明书,了解柱子的保存溶剂。如果保存溶剂与你将要使用的流动相极性不同不会互溶,请先用异丙醇过渡。过渡过程中注意因异丙醇粘度较大,会导致柱压很高,适当调低流速即可。如果要使用的流动相中还含有缓冲盐类,建议在用分析流动相之前,先用不含缓冲盐的同比例流动相过渡,这样可避免缓冲盐在分析柱内的析出。
  简析氨基柱的液相测定实验:
  一、实验仪器及材料
  液相色谱,4.6×150mm色谱分析柱。
  40mM NaH2PO4,甲醇(HPLC级别),乙腈(HPLC级别),超纯水,Borate Buffer(缓冲液),OPA(衍生剂);
  若测定胞内氨基酸:细菌过滤器,玻璃珠,Breaking Buffer,玻璃珠(直径0.5mm)。
  二、实验步骤
  1.样品的处理
  细胞外氨基酸的提。
 。1)取菌液1 mL离心(12000 rp/min离心10min)得上清,将上清转移至另一个1.5 mL EP管中,-20℃保存。
 。2)用细菌过滤器过滤样品,待测。
  细胞内氨基酸的提。
 。1)取菌液1 mL离心(12000 rp/min离心10min),得到菌体沉淀(保存在-20℃冰箱中),加入1mL Breaking Buffer重悬。
 。2)加入等体积玻璃珠(直径0.5mm),振荡30 s,冰浴放置30 s,重复8次。
 。3)4℃,12000rpm,离心10 min,取上清,用细菌过滤器过滤,待检测。
  2.流动相配制
  流动相A:(40mM NaH2PO4):称取12.48g(或6.24g)NaH2PO4.2H2O固体粉末,溶于2L(或1L)超纯水中,完全溶解后,用饱和NaOH调节PH至7.8。采用真空抽滤泵抽滤,抽滤后超声波除气1h。
  流动相B:乙腈(HPLC级别)。
  流动相C:(乙腈:甲醇:超纯水=45:45:10):用洁净的量筒分别量取乙腈450mL,甲醇450mL,超纯水100mL,混匀。
  流动相D:超纯水。
  三、HPLC操作
  1.前期操作
 。1)在开始菜单中打开“CAGBootp”,点击“Bootp”打开软件包。
 。2)打开HPLC仪器5个开关。
 。3)首先用水(流动相D:100%),流速1 mL/min冲洗系统,待水从端口处流出时,连接柱子,待再次从柱子另一头流出时,将柱子连在仪器上。
 。4)再用50%的乙腈(流动相C:50%,流动相D:50%)冲洗柱子约30 min(压力在50Pa左右)。
  2.冲柱子程序
  流动相为包括A和B。A为40mM NaH2PO4水溶液(pH=7.8);B为甲醇,乙腈和双蒸水的混合溶液(45:45:10)。先设置打一针水,标准进样,流量1ml/min,持续时间:80min。
  3.进样测定
  1孔为borate buffer,2孔为水,3孔为opa,后面为样品。
  进样参数:流量2.00ml/min,进液量3.5μL,检测波长338 nm,柱温40℃,梯度洗脱。
  4.洗柱子
  待样品打完后,现用水冲洗30min(流动相D:100%),再用50%的乙腈冲洗约1h(流动相C:50%,流动相D:50%),最后用100%的乙腈冲洗约30min(流动相C:100%)。
  5.实验完成后将仪器关闭,柱子保存好。
021-62176111
六合拳开奖结果_点击这里给我发消息
 

化工仪器网

六合拳开奖结果_高级会员

高级会员

6

推荐收藏该企业网站
六合拳开奖结果-六合拳彩开奖记录
Baidu
sogou
扫一扫访问手机站扫一扫访问手机站
访问手机站